免疫組化實(shí)驗(yàn)操作之組織石蠟切片制作
更新時(shí)間:2015-11-18 點(diǎn)擊次數(shù):1784次組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊,用切片機(jī)制成切片的過(guò)程為石蠟切片法。石蠟切片法現(xiàn)使用的切片機(jī)有平推式切片機(jī)、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)兩種。
一、平推式切片機(jī)石蠟切片法
1.切片前的準(zhǔn)備:清洗過(guò)的載物片(或免清洗的),毛筆,鉛筆,小竹片,水槽,霧化器,攤片器,切片刀,刀架。
2.切片制作步驟:刀架的粗削部放在頭端,在切片機(jī)刀架部夾緊。組織蠟塊裝在切片機(jī)蠟塊固定器上夾緊。右手握切片機(jī)刀頭運(yùn)動(dòng)手柄,左手轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)蠟塊運(yùn)動(dòng) 旋鈕。先轉(zhuǎn)動(dòng)此鈕,后平拉刀架運(yùn)動(dòng)手柄,進(jìn)行粗削,直至組織切全。停止,將刀架移到細(xì)削部,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)蠟塊運(yùn)動(dòng)旋鈕,后拉刀架手柄進(jìn)行細(xì)削。削至組織光滑發(fā) 亮,右手拿毛筆掃凈刀架及蠟塊上的蠟屑,組織屑,放下毛筆,再用右手握住刀架運(yùn)動(dòng)手柄。左手拿小竹片,用竹片頭蘸一下水槽中的水。左手中指搬動(dòng)薄切鈕,霧 化器的噴頭對(duì)準(zhǔn)蠟塊。右手拉刀架運(yùn)動(dòng)手柄。左手中的小竹片在蠟塊空白處等待切片刀切起蠟片一端挑起粘住,隨切片刀移動(dòng),完整的蠟片切出后,粘在竹片上,移 入水槽中,撈片,放在攤片器上攤片5 min后,裝在染色籃上,放入75℃烤箱烤片。
3.注意事項(xiàng)
(1)無(wú)冷臺(tái)的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內(nèi),但如放置時(shí)間過(guò)久溫度太低切片時(shí)蠟塊會(huì)產(chǎn)生熱漲,切片會(huì)厚,要多切幾張,后面的片子就會(huì)薄一些。
(2)霧化器是去除靜電的,但也有增加切片厚度的缺陷。尤其霧氣大時(shí),使蠟塊熱漲,厚度增加更明顯。為了保證切片厚度,一定要控制好風(fēng)力、霧力。霧化器使用自來(lái)水,水位控制在30刻度。
(3)切片機(jī)使用前一定要檢查各部位情況。先檢查固定器是否固定在你所要的厚度上。切片機(jī)刀架角度與蠟塊呈90。。從蠟塊右上角進(jìn)刀。
二、輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)石蠟切片法
1.切片前的準(zhǔn)備:清洗過(guò)的載玻片、毛筆、鉛筆、盛有30%乙醇的小燒杯、牙科鑷、展片槽、切片機(jī)、一次性刀片及刀架。檢查輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)切片厚度的鈕是否固定于你所要切的厚度刻度上。
2.切片制作步驟:將放在-5℃冷臺(tái)上的組織蠟塊裝在切片機(jī)固定器上夾緊,空白蠟多的一端在上。將切片刀固定一端為粗削部,左手旋動(dòng)蠟塊推動(dòng)器,右手旋動(dòng) 切片機(jī)把手。先搖動(dòng)蠟塊推動(dòng)器,后搖動(dòng)切片機(jī)機(jī)頭半輪上下運(yùn)動(dòng),進(jìn)行粗削,一進(jìn)一削,直至組織切全。而后將切片刀移至另一端進(jìn)行細(xì)削,削至蠟塊光滑平整。 用毛筆將其刀架、蠟塊面清掃干凈。左手持毛筆,右手整輪轉(zhuǎn)動(dòng)切片機(jī)手柄進(jìn)行切片。將毛筆貼于刀架背不時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng),輕輕托起連片的蠟片。右手停止轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)頭,換持 牙科鑷,夾住連片蠟片頭端,放入盛30%乙醇的燒杯內(nèi)。用牙科鑷去除不好的蠟片。放入水溫45~50℃水槽內(nèi)展片后撈片。
3.注意事項(xiàng)
(1)無(wú)冷臺(tái)的病理科可以將包埋好的組織蠟塊放到冰箱內(nèi),但如放置時(shí)間久溫度太低注意切片時(shí)蠟塊會(huì)產(chǎn)生熱漲,切片會(huì)厚,要多切幾張,后面的片子就會(huì)薄一些。
(2)為了能夠連片,蠟塊兩端要有空白蠟。多的一端放在上面。
(3)展片槽溫度不要過(guò)高,有時(shí)會(huì)有小組織塊散漂在水面上造成污染。可用手紙折成與水槽寬度相同水面行走,將組織屑撈走。