T細胞亞群檢測試劑盒操作步驟說明-信帆生物
更新時間：2019-01-25 點擊次數：3642次T細胞亞群檢測試劑盒操作步驟說明-信帆生物
T細胞亞群檢測試劑盒，CD3CD4CD8檢測試劑盒-信帆生物
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T 細胞亞群檢測試劑盒說明書
一：試劑盒組成：
1. 防脫片劑2ml
2. 固定液10ml
3. A 小鼠抗人CD3 單抗1ml
B 小鼠抗人CD4 單抗1ml
C 小鼠抗人CD8 單抗1ml
4. 生物素標記羊抗小鼠IgG（ IgG/Bio） 1.5ml × 2
5. 堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2
6. A 底物增強劑（ 40×) 200μl
B 底物液（ 40× ) 200μl
C 底物緩沖液（ 10× ) 800μl
7. 細胞核復染液5ml
8. 封片劑1ml
9. 記號筆1 支
10. PBS 2 包(1000ml)
二：標本制備：
取肝素抗凝（25μl/ml）的靜脈血1~2ml，PBS 稀釋1-2 倍后，沿裝有等量淋巴細
胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層，保持兩種液體界面清晰，離心（2000
轉/分）15-20 分鐘，吸取兩液面交界處的單個核細胞層，加5 倍PBS，離心（1000
轉/分）5 分鐘，棄上清液，沉淀即為單個核細胞。利用試管中剩余的少許回流
液體（約一滴）混勻細胞，制成單個核細胞懸液。滴30μl 細胞懸液于載玻片上，
靜置2 分鐘使細胞下沉粘附于玻片上，吸去液體，快速吹干或37℃溫箱1 小時
烤干。或用PBS 將單個核細胞調至2×105 個/ml，離心涂片機1000 轉離心1-2
分鐘制片，快速吹干或37℃溫箱1 小時烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl 均勻推
片，亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上，待干后制備細胞涂片，以防
掉片。
三：顯色劑的配制：
分別取A 液25ul，B 液25ul 置于干凈試管中混勻，室溫放置2-5 分鐘，加1ml
蒸餾水，混勻，再加C 液100ul 待用。
*使用前，根據所需顯色劑用量，按照以上比例現配現用。
四：標本染色：
1. 充分干燥（室溫2 小時以上或過夜）的細胞涂片先用記號筆在標本外畫圈，
然后滴加固定液50μl，室溫靜置2-3 分鐘，用PBS 淋洗，擦干玻片背面及細胞
外的PBS。
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*以下反應均需在濕盒中進行。
2. 分別滴加抗人CD3、CD4、CD8 單抗適量（10-30μl）， 4℃過夜，PBS 淋洗3
次。
3. 滴加生物素標記抗小鼠IgG 適量（10-30μl），37℃孵育30-45 分鐘，PBS 淋
洗3 次。
4. 滴加堿性磷酸酶標記鏈霉卵白素適量（10-30μl）37℃孵育30-45 分鐘，PBS
淋洗3 次。
5. 滴加顯色劑30-50μl，室溫顯色20-40 分鐘。可在顯微鏡下觀察，待細胞膜上
出現紅色標記物時，用PBS 淋洗。
6. 滴加細胞核復染液30-50μl，30 秒后自來水淋洗。
7. 滴加封片劑，蓋片封片，鏡檢。如不需保存亦可用水替代封片劑蓋片鏡檢。
五：觀察：
高倍鏡下選取染色好的視野記數100-200 個單個核細胞，細胞表面有紅色標記物
為陽性細胞。算出陽性率。
六：正常參考值：
正常人外周血中，陽性細胞百分率一般在：CD3，60-80%；CD4，35-55%；CD8，
20-30%；CD4/CD8 的比值在1.5-2.0 范圍內。
T細胞亞群檢測試劑盒，CD3CD4CD8檢測試劑盒-信帆生物
T細胞亞群檢測試劑盒操作步驟說明-信帆生物
